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        PCR試劑盒標準操作流程,一起來了解一下

        發布時間:2022-03-11   點擊次數:141次
               PCR試劑盒標準操作流程:
          一、試劑制備:
          1、DNA模板。
          2.特定引物。
          3.dNTPMix。
          4.PCRbuffer。
          5、熱啟動酶。
          二、行動
          1.構建反應系統
          在0.5ml的離心管內依次加入各組分。
          采用熱啟動酶進行擴增,使其在常溫下運行,非熱啟動酶在低溫配置反應體系。
          根據試劑盒說明書設定反應時間和溫度,擴增結束后進行電泳鑒定.
          三、瓊脂糖核酸電泳
          把電泳所用的器皿蒸餾水清洗干凈,把梳子固定好。
          以待分離片段的大小為基礎,制備適當濃度的瓊脂糖凝膠,精確稱取一定數量的瓊脂糖,加入錐形瓶,并加入約30ml電泳緩沖液(TAE)。
          用微波爐加熱熔化,冷卻至40℃左右,充分混合后倒入電泳槽。
          在室溫下進行40分鐘的凝固,小心地拔出梳子,將凝膠放入電泳槽準備點樣。
          向電泳槽內加入電泳緩沖液,漫過膠體表面即可,點樣孔內無氣泡。
          點樣前準備好,(在八連管中)加入5ul樣品,把1ul的6xLodingbuffer和1ul的染料混合,用搶把混合的樣品緩慢地注入點樣孔,注意不能有串孔。
          按正負極(紅,黑,黑)接通電源,電壓40-60V,時間30-40min,根據溴酚藍的位置可判斷電泳是否終止。
          結束電泳,關閉電源,觀察凝膠成像,通過對比確定碎片的大小。
          以上就是PCR試劑盒標準操作流程!
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