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        轉基因元件NtQPT1啟動子LAMP試劑盒

        轉基因元件NtQPT1啟動子LAMP試劑盒

        產品時間:2020-08-05

        訪問量:191

        廠商性質:經銷商

        生產地址:進口、國產

        簡要描述:
        轉基因元件NtQPT1啟動子LAMP試劑盒低溫運輸,-20℃保存,保存期限為12個月。陽性對照需要因易污染其他成分需要單獨放置。本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供DN段作為陽性對照。
        品牌其他品牌CAS詳見說明書
        分子式詳見說明書純度詳見說明書
        分子量詳見說明書貨號GOYP63868
        規格50次供貨周期現貨
        主要用途公司產品僅用于科研應用領域化工

        產品優勢:
        1.產品僅用于科研隨時可用。
        2.優化的緩沖液可增強特異性并減少引物二聚體的形成。
        3.高靈敏度,特異性和可靠性。
        4.為不同的qPCR儀器提供了被動參考染料。

        產品名稱 轉基因元件NtQPT1啟動子LAMP試劑盒
        英文名稱 Lamp kit for promoter of transgenic element ntqpt1
        規格 50次

        儲存條件:
        僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
        1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
        2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
        3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
        4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
        5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

        使用方法:
        一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
        1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對照。
        2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
        3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
        4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
        5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
        6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
        7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

        實驗過程:
        一、試劑準備
        1. DNA模板
        2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
        3.10×PCR Buffer
        4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
        5.Taq酶
        二、操作步驟
        1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
        10×PCR buffer             5μl
        dNTP mixl                 4μl
        引物1(10pM)               2μl
        引物2(10PM)              2μl
        Taq酶(2U/μl)            1μl
        DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
        加ddH2O至               50 μl
        視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
        2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。
        3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
        4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
        三、注意事項
        1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。設立一個的PCR實驗室。
        2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
        3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
        4.PCR試劑配制應使用高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
        5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
        6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
        7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。

        LAYN Others Human Layilin 人細胞裂解液 (陽性對照) 硫酸鈣(>99%,BR)質量規格:>99%,BRCalcium sulfate, anhydrous

        CM-H084人臍靜脈平滑肌細胞完全培養基100mL二環己基碳二亞胺(>99%,BR)質量規格:>99%,BRDCC, Dicyclohexylcarbodiimide

        SERPINI1 Others Mouse 小鼠 SerpinI1 / Neuroserpin 人細胞裂解液 (陽性對照) 丁二酸二甲酯(>99%,BR)質量規格:>99%,BRDimethyl succinate

        小鼠角膜上皮細胞完全培養基 100mL二甲基甲酮鈉鹽(>97%,BR)質量規格:>97%,BRDimethylglyoxime  salt

        L6565小鼠白血病克隆細胞系 L6565 murine leukemia cell line RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS直接藍71(50%,BR)質量規格:≥50%,BRDirect blue 71

        軟骨細胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)N-苯甲酰-2'-脫氧胞苷質量規格:>98%,BRbz-dC

        MAP3K8 Others Human TPL2 / MAP3K8 / MEKK8 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) N6-苯甲酰-2'-脫氧腺苷質量規格:>98%,BRbz-dA

        KM小鼠子瘤株;U145'-O-三苯甲基尿苷質量規格:>97%,BRTrt-rU

        NIH/3T3細胞,胚胎成纖維細胞 人高轉移肝癌細胞,LM3細胞 CL-0104HEp-2(人喉表皮樣癌細胞)5×106cells/瓶×2Trt-dU質量規格:>98%,BRTrt-dU

        敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21N2-洛沙坦-洛沙坦(洛沙坦雜質)質量規格:美國進口N2-Losartanyl-losartan (Losartan Impurity)

        SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1 膀胱變移細胞癌,T-24細胞 U251(膠質瘤細胞)Murexide基紫色酸1BS

        EB病毒轉化的人B細胞;KMY09275,5`-二流雙(2-肖基本加醋) 3-Ccrboxy-4-nitnophqnyl disulfidq 69-78-3

        EFNB2 Others Mouse 小鼠 EFNB2 / EphrinB2 人細胞裂解液 (陽性對照) Manganesechloride錄化亞錳5BR,99%

        CM-R101大鼠腦動脈血管平滑肌細胞完全培養基100mLBT四唑藍500毫克超,50mg/ml,有害品

        HEXB Others Human Hexosaminidase B / HEXB 人細胞裂解液 (陽性對照) 302-84-1DL-絲酸;DL-蠶絲基酸;DL-2--3-羥基酸;DL-β-羥基酸DL-Serine;DL-2-AMino-3-xy7noxypropionic acid;DL-β-xy7noxyalanine;(±)-2-AMino-3-xy7noxypropionic acid; DL-3-xy7noxy-α-alanine

        人整合SV40基因的上皮細胞;HBL-100 [HBL100]鈮標準溶液(1000μg/ml)Niobium standard質量規格:1000μg/ml

        DNASE1 Others Human DNASE1 / Deoxyribonuclease I / DNL1 人細胞裂解液 (陽性對照) 鎳標準溶液(100μg/mL,基體:1%HNO3)Nickel Standard質量規格:100μg/mL,基體:1%HNO3

        CL-0384MDA-MB-468-06(人癌細胞)5×106cells/瓶×2鉀標準溶液(500mg/L,溶劑:水)Potassium standard質量規格:500mg/L,溶劑:水

        Mv1Lu細胞,貂肺上皮細胞 人紅白細胞白血病細胞,HEL細胞 人皮膚成纖維細胞;HSAS4鉀標準溶液(1000µg/mL,基體:1%HCl) Potassium Solution質量規格:1000µg/mL,基體:1%HCl

        鯉魚尾鰭細胞;YZ16鐠標準溶液(1000μg/ml)Praseodymium standard質量規格:1000μg/ml

        PCR實驗步驟:

        ①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
        ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
        ③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
        ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
        轉基因元件NtQPT1啟動子LAMP試劑盒⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
        ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。

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